Американські вчені розробили і перевірили на пацієнтах генно-модифікований препарат на основі герпесвірусного вектора, що дозволяє знизити тяжкість ураження шкіри при булезному епідермолізі. B-VEC (beremagene geperpavec) відновлює експресію колагену сьомого типу в клітинах шкіри. Ліки у вигляді гелю наносяться прямо на уражені ділянки і зменшує площу раневої поверхні і час загоєння рани. Дослідження опубліковано в журналі.
Рецесивний дистрофічний булезний епідермоліз - рідкісне генетичне захворювання шкіри, що викликається мутаціями в гені, який кодує колаген сьомого типу. Цей колаген збирається в якірні фібрили, які в складі базальної мембрани скріплюють епідерміс і дерму. Колаген сьомого типу містить два важливих неколлагенових домени: NC1, за допомогою якого якірні фібрили вставляються в базальну мембрану, і NC2, який відповідає за складання якірних фібрил. При дефектах колагену сьомого типу порушується зчеплення дерми та епідермісу, що призводить до розвитку болючих бульбашок на шкірі по всьому тілу, які підвищують ризик інфекції, утворюють рубці і схвильовують до раку шкіри. Це надзвичайно важке для пацієнтів захворювання, і в даний час не існує методів його лікування.
Попередні розробки лікування булезного епідермолізу стосувалися пересадки кісткового мозку, проте ефективність процедури залишається під питанням. Ефективність пересадки власних генно-модифікованих клітин епідермісу з працюючим геном варіювала від пацієнта до пацієнта і з часом повільно знижувалася. Втім пересадка генно-модифікованої шкіри пацієнту з дефектом гена білка ламініна показала хороші результати в п'ятирічному періоді спостережень. Однак ця операція пов'язана з великою кількістю ускладнень, у тому числі інфекційних та імунних.
Пітер Маринкович (Peter Marinkovich) і його колеги зі Стенфордського університету розробили генно-модифікований препарат з герпесвірусним вектором, що несе на собі здоровий ген, у вигляді гелю, який потрібно наносити на шкіру. Вчені вибрали вектори вірусу простого герпесу першого типу тому, що вони ефективно проникають в клітини і добре «обходять» імунний нагляд організму, не викликаючи побічних імунних реакцій. До того ж ймовірність мутації в них нижча, і вони можуть вмістити більше інформації.
У доклінічному випробуванні мишам, які в точності повторювали фенотип шкіри при булезному епідермолізі з дефіцитом колагену сьомого типу, внутрішньошкірно вводили B-VEC. Кожна миша отримала три ін'єкції B-VEC і одну ін'єкцію фізіологічного розчину. Деякі миші отримали другу дозу препарату і фізіологічного розчину на третій день у ті ж чотири місця. На третій день після введення B-VEC колаген виявляли в дермально-епітеліальних сполуках і в волосяних фолікулах. На сьомий день колаген локалізувався на більшій площі шкіри.
Щоб додатково оцінити ефект B-VEC in vivo, вчені пересадили людську шкіру, в якій не синтезується колаген сьомого типу, імунодефіцитним мишам. Ця модель вважається найбільш близькою до шкіри людини з рецесивним дистрофічним булезним епідермолізом. До досліджуваної групи потрапило 16 мишей, до групи контролю - чотири. У всієї групи контролю спостерігалися множинні ділянки дермально-епідермального поділу, чого не було на трансплантатах, де місцево застосовували B-VEC.
Збірку колагену сьомого типу в якірні фібрили вважають тестом його функціональної спроможності, оскільки цей процес вимагає повнорозмірних молекул колагену, що містять домени NC1 і NC2. Вчені оцінювали цю збірку за допомогою електронної мікроскопії. На 12 день після лікування вчені виявили правильну ультраструктурну локалізацію NC1 в щільній платівці (lamina densa) і NC2 приблизно на 300 нанометрів нижче щільної платівки, що узгоджується з попередніми дослідженнями структурної локалізації доменів NC1 і NC2 в нормальній шкірі людини.
У дослідження безпеки B-VEC включили дев'ять осіб (дорослих і дітей) з клінічними проявами булезного епідермолізу, підтвердженими мутаціями в гені, зниженою експресією білка NC1 і NC2 і без якірних фібрил в базальній мембрані.
Всього вчені використовували B-VEC 129 разів і зареєстрували 21 небажане явище: 15 з них визнані не пов'язаними з препаратом, чотири (лихоманка, специфічний смак, висип, свербіж) - можливо пов'язані і два (реакції в місці нанесення) - ймовірно пов'язані. Всі небажані явища вирішилися в ході дослідження, і жодне з них не зажадало зниження дози або частоти нанесення B-VEC. Повідомлень про серйозні небажані явища не надходило. Антитіла до вірусу простого герпесу першого типу залишалися на колишніх рівнях і не впливали на ефективність і безпеку ліків.
Загоєння всіх ран у групі B-VEC настало через три місяці, за винятком хронічної (п'ять років) рани на тильній стороні стопи в одного пацієнта, проте після другого курсу лікування вона зажила. У контрольній групі повторно утворювалися бульбашки протягом трьох місяців. Рани, оброблені B-VEC, статистично значимо відрізнялися від ран, оброблених плацебо (р = 0,0026). Ефект лікування також оцінювався за середньою відсотковою зміною площі раневої поверхні: зменшення площі рани було статистично значущим на 8, 10 і 12 тижнях (р < 0,025). Також B-VEC прискорював загоєння ран і знижував ризик їх рецидивів
У біоптатах шкіри семи пацієнтів вчені оцінювали ступінь експресії NC1 і NC2 порівняно зі здоровою шкірою. Хоча в них була відзначена варіабельність експресії NC1 і NC2, в більшості зразків лікарі виявили лінійні відкладення колагену сьомого типу. У всіх пацієнтів, яким перед початком лікування провели біопсію шкіри, були відсутні якірні фібрили. Після лікування на імуногістохімічному аналізі вчені виявили зрілі якірні фібрили. На 97 день лікування в шкірі щільна платівка збільшилася за рахунок NC1, а домен NC2 був приблизно на 300 нанометрів нижче щільної платівки, що відповідає стану нормальної шкіри.
Таким чином, це дослідження показує, що місцеве регулярне застосування B-VEC підвищує експресію колагену сьомого типу в шкірі хворих на рецесивний деструктивний булезний епідермоліз, тим самим сприяючи активному і стійкому загоєнню ран. Крім того, B-VEC є першим ефективним препаратом генної інженерії з прямим перенесенням генів. Зручність його застосування і доступність дозволять використовувати його в амбулаторних умовах, що додатково знижує ризики для хворих, адже їм не потрібно здійснювати довгі поїздки в спеціалізовані центри. В даний час вчені проводять третю фазу дослідження B-VEC.
Кілька років тому ми поговорили зі співробітниками благодійного фонду «Діти-метелики», що займається допомогою дітям з булезним епідермолізом. З цієї розмови можна дізнатися, як живуть такі діти, чим їх лікують зараз, і як їм допомогти.